ЭФФЕКТИВНЫЕ ФОРМУЛЫ

ГИАЛУРОНОВАЯ КИСЛОТА

 

 

Гиалуроновая кислота является основным компонентом кожи, где она принимает участие в процессах регенерации, пролиферации и миграции клеток, гидродинамике тканей, а также в ряде взаимодействий рецепторов поверхности клеток, особенно с первичными рецепторами, CD44 и RHAMM. Человек со средним весом 70 кг имеет примерно 15 грамм гиалуроновой кислоты в организме, одна треть которой метаболизируется (расщепляется и синтезируется) каждый день. К примеру, когда кожа подвергается чрезмерному воздействию УФ-В лучей, она воспаляется (солнечный ожог), клетки в дерме прекращают производить гиалуроновую кислоту, и при этом скорость ее расщепления увеличивается. Продукты распада гиалуроновой кислоты затем накапливаются в коже после воздействия ультрафиолетового облучения. Гиалуроновая кислота и TLR играют роль в системе врожденного иммунитета и развитии мозга.

Гиалуроновая кислота представляет полимер дисахаридов, состоящих из D-N-ацетилглюкозамина и D-глюкуроновой кислоты, соединенных поочередно β-1,4 и β-1, 3- гликозидными связями. Гиалуроновая кислота может содержать по 25000 подобных дисахаридных звеньев. Полимеры гиалуроновой кислоты могут варьироваться в размере от 5000 до 20000000 Да в естественных условиях. Средний молекулярный вес в синовиальной жидкости человека составляет 3-4 миллиона Да; гиалуроновая кислота, выделенная из человеческой пуповины имеет 3140000 Да. Гиалуроновая кислота энергетически стабильна, отчасти из-за стереохимии составляющих ее дисахаридов.

 

Биологический синтез

Гиалуроновая кислота синтезируется классом интегральных мембранных белков, называемых гиалуронан-синтазами, из которых в организме позвоночных содержатся 3 типа - HAS1, HAS2 и HAS3. Данные ферменты удлиняют гиалуроновую кислоту, последовательно добавляя N-ацетилглюкозамин и глюкуроновую кислоту к исходному полисахариду, при этом передавая полимер с помощью ABC-транспортера через клеточные мембраны в межклеточное пространство. Было показано, что синтез гиалуроновой кислоты (HAS) ингибируется 4-метилумбеллифероном («химекромон», «хепарвит»), производным 7-гидрокси-4-метилкумарина.

Клеточные рецепторы для гиалуроновой кислоты подразделяются на три основные группы: CD44, рецептор для ГК-опосредованной подвижности (RHAMM) и внутриклеточные молекулы адгезии-1 (ICAM-1). CD44 и ICAM-1 уже были известны как молекулы адгезии клеток с другими признанными лигандами, прежде чем было обнаружено их ГК-связывание. CD44 опосредует взаимодействие клеток с гиалуроновой кислотой и связывание обоих оказывает важное влияние в различных физиологических событиях, таких как агрегация клеток, миграция, пролиферация и активация; адгезия «клетка-клетка» и «клетка-субстрат»; эндоцитоз гиалуроновой кислоты, которая приводит к ее катаболизму в макрофагах; а также сборка околоклеточных матриксов из протеогликанов и гиалуроновой кислоты.

 

Две значительные роли CD44 в коже :

Первая заключается в регуляции пролиферации кератиноцитов в ответ на внеклеточные стимулы, а вторая - в поддержании местного гомеостаза гиалуроновой кислоты. ICAM-1 известен в основном как метаболический рецептор клеточной поверхности для гиалуроновой кислоты, и этот белок может быть ответственным, в основном, за выделение кислоты из лимфы и плазмы крови, что составляет большую часть метаболизма всего организма. Связывание лиганда этого рецептора, таким образом, вызывает высоко скоординированный каскад событий, который включает в себя образование эндоцитотического пузырька, его слияние с первичными лизосомами, ферментативное расщепление до моносахаридов, активный трансмембранный транспорт этих сахаров в клеточный сок, фосфорилирование GlcNAc и ферментативное деацетилирование. Как и его название, ICAM-1 также может служить молекулой клеточной адгезии, и связывание гиалуроновой кислоты с ICAM-1 может способствовать контролю ICAM-1-опосредованной активации воспаления. Расщепление гиалуроновой кислоты

Гиалуроновая кислота расщепляется семейством ферментов, называемых «гиалуронидазы». У людей есть, как минимум, семь видов гиалуронидазоподобных ферментов. Продукты расщепления гиалуроновой кислоты, олигосахариды и гиалуронат с крайне низкой молекулярной массой, проявляют проангиогенные свойства.

 

Роль гиалуроновой кислоты в процессе регенерации кожи

 

Кожа служит механическим барьером к внешней среде и действует для предупреждения проникновения инфекционных агентов. После повреждения, нижележащие ткани подвержены инфицированию; таким образом, быстрое и эффективное заживление оказывает решающее значение для восстановления барьерной функции. Заживление ран кожи является очень сложным процессом, и включает в себя множество взаимодействующих процессов, инициированных гемостазом и высвобождением тромбоцитарных факторов. Следующие стадии - это воспаление, образование грануляционной ткани, реэпителизация и ремоделирование. Гиалуроновая кислота играет многогранную роль в опосредовании этих клеточных и матричных событий.

Воспаление Многие биологические факторы, такие как факторы роста, цитокины, эйкозаноиды и др., образуются в процессе воспаления. Эти факторы являются необходимыми для последующих стадий заживления ран вследствие их ролей в содействии миграции воспалительных клеток, фибробластов и эндотелиальных клеток в месте раны. Ткань раны в начале воспалительной фазы заживления раны изобилует гиалуроновой кислотой, что вероятно, является отражением усиленного синтеза. Гиалуроновая кислота действует как промоутер раннего воспаления, что имеет решающее значение в целом для процесса заживления раны кожи. В мышиной модели воздушного кармана, в процессе каррагинан/IL-1-индуцированного воспаления, отмечалось, что гиалуроновая кислота усиливает клеточную инфильтрацию.

Грануляция и организации матрикса грануляционной ткани Грануляционная ткань является хорошо кровоснабжаемой, волокнистой соединительной тканью, которая замещает фибриновые сгустки в заживающих ранах. Она обычно растет от основания раны и может заполнить раны практически любого размера. Гиалуроновая кислота содержится в изобилии в грануляционной ткани матрикса. Множество различных функций клеток, которые существенно необходимы для восстановления тканей, можно приписать этой сети, богатой гиалуроновой кислотой. Эти функции включают усиление миграции клеток в предварительный матрикс раны, клеточной пролиферации и организации матрикса грануляционной ткани.

 

Гиалуроновая кислота и миграция клеток

Миграция клеток имеет важное значение для образования грануляционной ткани. В ранней стадии грануляционной ткани преобладает внеклеточный матрикс, богатый гиалуроновой кислотой, которая считается благоприятной средой для миграции клеток в этот временный матрикс раны. Содействие гиалуроновой кислотой миграции клеток можно отнести к ее физико-химическим свойствам, как указано выше, а также ее прямому взаимодействию с клетками. По прежнему сценарию, гиалуроновая кислота представляет собой открытый гидратированный матрикс, который усиливает миграцию клеток, тогда как в последнем сценарии, управляемая миграция и контроль локомоторных механизмов клеток опосредуются через специфическое взаимодействие клеток между гиалуроновой кислотой и поверхностными ГК-рецепторами клеток. Как уже говорилось ранее, тремя основными поверхностными рецепторами клеток для гиалуроновой кислоты являются CD44, RHAMM, и ICAM-1. RHAMM больше связан с миграцией клеток. Он образует связи с несколькими протеинкиназами, связанных с локомоцией клеток, например, протеинкиназа (ERK), регулируемая внеклеточным сигналом, p125fak, и pp60c-src. Во время внутриутробного развития, пути миграции, через которые мигрируют клетки нервного гребня, богаты гиалуроновой кислотой. Гиалуроновая кислота тесно связана с процессом миграции клеток в матриксе грануляционной ткани, и исследования показывают, что движение клетки может быть ингибировано, по крайней мере, частично, расщеплением гиалуроновой кислоты или блокированием занятости ГК-рецепторов. Обеспечивая клетку динамической силой, синтез гиалуроновой клетки, как было показано, связывается с миграцией клеток. В основном, кислота синтезируется на плазматических мембранах и выделяется прямо во внеклеточную среду. Это может содействовать гидратированному микроокружению в местах синтеза, и имеет важное значение для миграции клеток, так как способствует отделению клеток.

Роль гиалуроновой кислоты в ведении воспалительной реакции

Хотя воспаление является неотъемлемой частью образования грануляционной ткани, для нормального восстановления тканей, чтобы продолжить, воспаление должно управляться. В первоначально образовавшейся грануляционной ткани процесс воспаления является очень интенсивным с высокой скоростью метаболизма ткани, опосредованным ферментами, расщепляющих матрикс и реактивными метаболитами кислорода, которые являются продуктами воспалительных клеток. Стабилизация матрикса грануляционной ткани может быть достигнута путем модерирования воспаления. Гиалуроновая кислота функционирует в качестве важного модератора в этом процессе, что противоречит ее роли в воспалительной стимуляции.

Гиалуроновая кислота может защитить от вредного воздействия свободных радикалов на клетки. Это благодаря свойству очистки от свободных радикалов, физико-химическому свойству, разделяемому полиионными крупными полимерами. TNF-α, важный цитокин, образующийся при воспалении, стимулирует экспрессию TSG-6 (TNF-стимулированный ген 6) в фибробластах и воспалительных клетках. TSG-6, ГК-связывающий белок, также образует стабильный комплекс с сывороточным ингибитором протеиназы IαI (Inter-α-ингибитор) с синергетическим эффектом на плазмин-ингибирующей активности последнего. Плазмин участвует в активации протеолитического каскада матричных металлопротеиназ и других протеиназ, ведущих к воспалительному повреждению тканей. Таким образом, действия комплекса TSG-6 / IαI, которые могут быть дополнительно организованы путем связывания с гиалуроновой кислотой во внеклеточном матриксе, могут служить мощной отрицательной обратной связью, чтобы смягчить воспаление и стабилизировать грануляционную ткань по мере прогрессирования заживления.

 

 

Реэпителизация

Гиалуроновая кислота играет важную роль в нормальном эпидермисе. Гиалуроновая кислота также имеет важные функции в процессе реэпителизации в связи с ее несколькими свойствами. Она служит в качестве неотъемлемой части внеклеточного матрикса базальных кератиноцитов, которые являются основными составляющими эпидермиса, ее функция очистки от свободных радикалов и ее роли в пролиферации и миграции кератиноцитов. В нормальной коже, гиалуроновая кислота находится в относительно высокой концентрации в базальном слое эпидермиса, где находятся пролиферирующие кератиноциты. CD44 находится совместно с гиалуроновой кислотой в базальном слое эпидермиса, где дополнительно, экспрессируется преимущественно на плазматических мембранах, стоящих перед карманами матрикса, богатого кислотой. Поддержание внеклеточного пространства и обеспечение открытой, а также увлажненной, структуры для прохождения питательных веществ, являются основными функциями гиалуроновой кислоты в эпидермисе. Ученые обнаружили, что содержание гиалуроновой кислоты увеличивается в присутствии ретиноевой кислоты(витамина А). Предполагаемые эффекты ретиноевой кислоты против повреждения светом и старения кожи могут коррелироваться, по крайней мере частично, с увеличением содержания гиалуроновой кислоты в коже, что приводит к увеличению гидратации тканей. Было высказано предположение, что свойство очистки от свободных радикалов гиалуроновой кислоты вносит свой вклад в защиту от солнечного излучения, поддерживая роли CD44, выступающим в качестве ГК-рецепторов в эпидермисе. Эпидермальная гиалуроновая кислота также функционирует в роли манипулятора в процессе пролиферации кератиноцитов, что крайне важно в нормальном функционировании эпидермиса, а также во время реэпителизации в восстановлении тканей. В процессе заживления раны, гиалуроновая кислота экспрессируется в крае раны, в матриксе соединительной ткани, и выстраиваясь согласно экспрессии CD44 в миграции кератиноцитов. Многие нашли подавление экспрессии CD44 эпидермис-специфичным антисенсорным трансгеном, приведшему у животных накоплению дефектной гиалуроновой кислоты в поверхностной дерме, сопровождаемому различными морфологическими изменениями базальных кератиноцитов и дефектной пролиферации кератиноцитов в ответ на митоген и факторы роста. Также наблюдались снижение эластичности кожи, нарушенная местная воспалительная реакция и нарушенная регенерация тканей. Их наблюдения решительно поддерживают важные роли гиалуроновой кислоты и CD44 в физиологии кожи и регенерации тканей.

Нативная гиалуроновая кислота имеет сравнительно короткий период полураспада, так что были привлечены различные методы производства для увеличения длины цепи и стабилизации молекулы для применения в медицинских целях. Введение перекрестных связей на основе белка, введение молекул, очищающих от свободных радикалов, таких как сорбитол, и минимальная стабилизация цепей гиалуроновой кислоты с помощью химических реактивов.

Современные модели заживления раны предполагают, что более крупные полимеры гиалуроновой кислоты появляются на ранних стадиях заживления для того, чтобы физически освободить место для белых кровяных клеток, которые опосредуют иммунный ответ. Гиалуроновая кислота также используется в синтезе биологических каркасов аппликаций для заживления ран. Эти каркасы обычно имеют белки, такие как фибронектин, прикреплямые к гиалуроновой кислоте для облегчения миграции клеток в рану. Это особенно важно для людей с диабетом, страдающих от хронических ран.

 

Применение гиалуроновой кислоты в косметических целях

Гиалуроновая кислота является распространенным ингредиентом продуктов по уходу за кожей. Присутствие гиалуроновой кислоты в эпителиальных тканях, как было доказано, способствует пролиферации кератиноцитов и увеличивает присутствие ретиноевой кислоты, что приводит к увлажнению кожи. Взаимодействие гиалуроновой кислоты с CD44 управляет синтезом коллагена и нормальным функционированием кожи. Находясь во внеклеточном матриксе базальных кератиноцитов, гиалуроновая кислота имеет решающее значение для структурной целостности матрикса кожного коллагена. Эти преимущества делают гиалуроновую кислоту очень эффективной;

Гиалуроновая кислота с низкой молекулярной массой - это уменьшенная в размерах молекула кислоты после разрезания ферментами. Основная цель уменьшения размера этой молекулы – облегчить ее доставку в организм человека и повысить ее проникновение через кожный барьер. Недавние исследования показали, что гиалуроновая кислота с низкой молекулярной массой оказывает влияние на процессы перекисного окисления липидов и очищающей активности гидроксильных радикалов, радикала 1,1-дифенил-2-пикрилдидразил и супероксид-аниона.

Гиалуроновая кислота с низкой молекулярной массой, также ускоряет процесс заживления раны путем транспортировки факторов роста, таких как виронектин, и усиление миграции клеток. Она является несульфатированным полисахаридом, который состоит из глюкуроновой кислоты и N-ацетилглюкозамина. В молодом возрасте организм человека очень богат гиалуроновой кислотой, по этой причине у молодых людей кожа хорошо увлажнена и процесс заживления усиленный, однако ее количество резко ухудшается с возрастом, что делает кожу восприимчивой к морщинам, обезвоживанию и инфекции. Уменьшение размера этой молекулы и нахождение способов доставить ее через кожный барьер были и остаются вопросами большой важности.

Промышленно производимая гиалуроновая кислота выделяется либо из животных источников, из синовиальной жидкости, пуповины, кожи и гребней петухов, или от бактерий в процессе брожения или прямого выделения. Молекулярная масса гиалуроновой кислоты сильно зависит от ее источника; Гиалуроновая кислота с низкой молекулярной массой индуцирует высвобождение про-воспалительных цитокинов из клетки, в то время как кислота с высокой молекулярной массой способна подавлять эту активность. Другие исследования показали взаимодействие этих молекул с рецепторами (CD44, ICAM-1 и RHAMM), через которые она активирует внутриклеточные пути сигналов, что приводит к мнению, что гиалуроновая кислота является ключом в опосредовании миграции клеток. В косметике гиалуроновая кислота с низкой молекулярной массой используется как высоко эффективный увлажнитель, антиоксидант, стимулятор синтеза коллагена и пролиферации клеток и цитотаксиса; гиалуроновая кислота считается ключевым фактором в борьбе с процессом старения.